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黃曲霉素試劑盒詳細說明
黃曲霉素試劑盒詳細說明
更新時間:2018-05-18
訪問量: 1643
廠商性質: 生產廠家

黃曲霉素(Aflatoxin)ELISA試劑盒--價格合適,質量可靠。咨詢! 【質量承諾】: 非人為造成的產品質量問題,視具體情況,我司負責退貨換貨。

黃曲霉素試劑盒詳細說明產品概述:

黃曲霉素(AFT)酶聯免疫分析(ELISA

              試劑盒使用說明書

 

 

本試劑盒僅供研究使用。 

 聲明:應國家相關部門關于違禁字的規定本文中黃曲霉中的毒以堵替代

 

1 使用目的:

 

本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織(如雞、牛肉和豬肉),雞蛋、蜂蜜、牛奶、血清和尿樣中總黃曲霉堵素(AFT)殘留的定量檢測。

 

2 實驗原理

 

本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法,在微孔板包被有黃曲霉素偶聯抗原,加入黃曲霉(AFT)標準品或樣品,游離黃曲霉(AFT)與微孔條上預包被的黃曲霉(AFT)偶聯抗原互相競爭抗黃曲霉(AFT)抗體酶標記物,用 TMB 底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變為黃色,用酶標儀在 450nm 波長下進行檢測,吸光值與樣品中黃曲霉(AFT)含量成反比,通過標準曲線計算樣品中黃曲霉(AFT)的含量。

 

3 試劑盒組成

 

  • 預包被的 AFT 偶聯抗原的可拆酶標板:1 塊(12 孔×4 條)。

 

  • AFT 標準品:6 瓶(1ml/瓶),含量分別是: 0 ng/ml,0.1 ng/ml,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7ng/ml,8.1 ng/ml。

AFT 抗體酶結合物:1 瓶(3ml)。

顯色液 A1 瓶(3ml)。

顯色液 B1 瓶(3ml)。

終止液:1 瓶(3ml),2M 硫酸。

樣本稀釋液:1 瓶(10×,  3ml),用于樣品稀釋用。

濃縮洗滌液:1 瓶(20×,20ml),用于洗板。

說明書一份。

 

4 需要而未提供的材料

4.1 設備

4.1.1波長450nm酶標儀。4.1.2粉碎機。4.1.3量筒。4.1.4振蕩器。4.1.5漏斗。

4.1.6Whatman 或相當的濾紙。

4.1.7微量移液器。

4.2 試劑

4.2.1去離子水或蒸餾水。

4.2.2 甲醇。

5 貯存

試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍

未用完的微孔板應該密封干燥保存

6 注意事項

使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。

不要使用過期試劑盒。

試劑盒使用前,將試劑恢復至室溫(25±2℃),建議至少回溫2小時。

標準品中含有黃曲霉素,使用時應特別注意,操作時應帶手套。

終止液中含有硫酸,使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。

不同標準品、樣品所用吸頭不能混用,否則會影響試驗結果。

不同批號試劑盒中的試劑不得混用;不同標準品、樣品所用吸頭不得混用,否則會影響實驗結果。

稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液,否則會影響實驗結果

混合試劑時應避免起泡。

 

7 工作液準備

 

  • AFT標準品溶液:0ng/ml,0.1ng/ml ,0.3 ng/ml,0.9 ng/ml,2.7 ng/ml,8.1ng/ml
  • 濃縮洗滌液:用蒸餾水按1:20(1+19)稀釋備用
  • 樣本稀釋液:備用
  • 顯色劑:已備用,避免光線直照
  • 反應終止液:已備用

8 樣品處理程序(樣品在提取過程中,要嚴格按說明書操作,提取過程中應準確稀釋,否則會出現結果不準確,樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存)

8.110g粉碎的樣品,加 20ml 70%甲醇溶液

8.2強力振蕩3分鐘

8.3Whatman 濾紙過濾

8.425µl處理后的樣品,加入25µl樣本稀釋液于反應孔中(樣本稀釋倍數為2

9 酶免分析步驟

9.1 實驗須知

  • 實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫(25±2℃),時間約2小時?;販刂潦覝兀?/span>25±2℃)后再取出微孔條,多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注:一定保證回溫充分,否則影響檢測的精確度和準確度。
  • 使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
  • 請不要改變分析程序
  • 請使用精確的微量移液器
  • 操作一旦開始,請不要中斷任何程序
  • ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序,請嚴格按照要求操作
  • 為避免交叉污染,每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
  • 加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面

9.2 分析步驟

  • 預先進行編號,標記B0、標準品和樣品的位置,推薦進行雙孔檢測
  • 取所需數量的微孔(微孔條可拆),將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
  • 樣品稀釋液(10×)、濃縮洗滌液(10×)稀釋成工作液(蒸餾水或去離子水稀釋)
  • B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標準品溶液
  • 在各標準孔中加入50µl的標準品溶液
  • 在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
  • 在所有孔中加入50µl的抗黃曲霉素B1抗體酶結合物
  • 輕輕晃動反應板幾秒鐘。

9.3 37℃溫浴30min (溫浴過程中不時輕拍反應板,可以減少雙孔誤差)

9.3.1 甩掉孔中液體,用洗液洗滌微孔板5次,zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液

體。

9.4 反應

  • 洗滌程序完成后,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A,再加 50µl顯色液B;輕微晃動反應板使之*混勻
  • 37℃溫浴10min
  • 每孔中加入50µl終止液,混勻
  • 450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。
  • 結果計算

10.1定量分析

10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以*個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B0—0µg/L標準溶液的平均吸光度值

10.1.2以黃曲霉素B1濃度的對數值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標準曲線圖。根據樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應點的橫坐標,即為AFT濃度的對數值,求得反對數即為測定液中AFT濃度Cng/ml

10.1.3由于樣品經過了預先稀釋,因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數。

10.2 半定量測定

10.1.1目測半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品吸光度值的高低比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。10.1.2儀器半定量測定:首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行,根據樣品與標準品顏色深淺比較,判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。

  • 特異性

物質 交叉反應黃曲霉素B1 100% 黃曲霉素B2 80% 黃曲霉素G1 75% 黃曲霉素G2 30%

12 試劑盒參數

本試劑盒檢測下限為0.1ppb B0吸光度*值應大于1.0試劑盒吸光度板內誤差小于8%,板間誤差小于15%。

用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80%。

13試劑盒提供的標準曲線范圍為0.1ng/ml~8.1ng/ml。

14 分析限制

本試劑盒檢測為陽性的樣品應該用另一種方法如HPLCGC/MS加以確證。

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